配制
msc無血清培養(yǎng)基必須使用高質(zhì)量的水,如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為其缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子,既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微,也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素之一。
補充因子是代替血清的各種因子的總稱。msc無血清培養(yǎng)基必須補加3-8種因子,胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補充因子,其他多數(shù)為輔助作用的因子。按其功能不同,補充因子可分為五類:
1、激素和生長因子:很多細胞用無血清培養(yǎng)時需要加入激素,如胰島素、生長激素、胰高糖素等。胰島素是重要的細胞存活因子,與細胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成,抑制細胞凋亡。此外,雌二醇、孕酮等也是無血清培養(yǎng)基中常添加的補充因子。
2、結(jié)合蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白與細胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細胞獲取鐵元素的主要來源。白蛋白與脂類、激素、維生素、金屬離子和生長因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在無血清培養(yǎng)基中活性的作用,此外,由于牛血清白蛋白一般添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護細胞免受機械損傷。
3、貼壁因子:許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質(zhì),如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖粘連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞、CHO細胞等。
4、酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。
5、其他補充因子:一些細胞培養(yǎng)使用的無血清培養(yǎng)基還需要補充微量元素、維生素、脂類等低分子量物質(zhì)。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本產(chǎn)品。